如何使用反向移液技術(shù)更的移取蛋白溶液

每支移液器的量程通常都用純水和正向移液技術(shù)校準(zhǔn)過。因此我們推薦使用正向移液技術(shù)移取水性溶液，如緩沖液，稀釋酸或堿。當(dāng)移取不同于水的液體時(shí)，由于具有不同的液體特性，其移液量可能偏離所選的量程。比如 一些生物溶液的移液，可能會在移液器或試管中產(chǎn)生氣泡或泡沫，這將使移液量產(chǎn)生偏差。在這種情況下，我們推薦使用反向移液技術(shù)移取高粘度或者容易產(chǎn)生泡沫的液體。反向移液技術(shù)減少了噴濺，泡沫和氣泡形成。這種方法尤其適用于移取小體積的液體。

下面先介紹一下正向移液和反向移液技術(shù)的操作。

1.將按鈕壓至*停點(diǎn)。

2.將吸頭浸入液面下1cm處，緩慢釋放按鈕使其滑回原位。將吸頭從液體中移出，接觸容器邊緣除去多余的液體。

3.排液時(shí)，吸頭緊貼容器壁先輕按按鈕至*停點(diǎn)，略作停頓后，將按鈕按至第二停點(diǎn)（這個(gè)操作會將吸頭內(nèi)的液體*排盡），將吸頭從容器中沿容器壁移出。

4.松開按鈕至準(zhǔn)備位置。

1.將按鈕壓至第二停點(diǎn)。

2.將吸頭浸入液面1cm處，緩慢釋放按鈕使其滑回原位。這將時(shí)液體充滿吸頭。將吸頭從液體中取出，接觸容器邊緣去掉多余液體。

3.放液到接收容器時(shí)平穩(wěn)地輕按按鈕至*停點(diǎn)。保持在這個(gè)位置。一些液體會殘留在吸頭中不能被放出。

4.殘留在吸頭內(nèi)的液體能夠被吹回原溶劑中或者同吸頭一起丟棄。

5.松開按鈕到準(zhǔn)備位置。

    選擇合適的移液器對于微量移液的性也很重要。

    我們使用0.5-10 μl移液器，配合10ul吸頭，同時(shí)分別使用正向移液和反向移液，移取1%牛血清白蛋白（BSA，Sigma A7030）進(jìn)行移液性測試。

圖1 表明當(dāng)使用反向移液技術(shù)時(shí)，移液量的變化比使用正向移液技術(shù)處于更狹窄的一個(gè)范圍。

圖2 表明使用兩種移液方式的不度。不度是估量移液的重復(fù)性的。反向移液技術(shù)可以使不度相對于正向移液技術(shù)降低50%。

    這是因?yàn)椋珺SA溶液含有易被疏水移液器吸頭壁吸附的疏水成分。當(dāng)使用正向移液技術(shù)時(shí)，每次移液后少量的液體易殘留在吸頭中。這種趨勢會增加吹出液體體積之間的偏差，因?yàn)楫?dāng)重復(fù)移液時(shí)吸頭中累積的殘余液體可能增加下一次移液的移液量。而反向移液技術(shù)中有額外的液體被吸入吸頭中，這些額外的液體作用似一個(gè)蓄水池它使連續(xù)移液的移液量均等。這個(gè)蓄水池也能阻止空氣在吹出液體的zui后從吸頭口進(jìn)入，這樣可以降低液體起泡的可能性。這使反向移液技術(shù)在移取小液量液體時(shí)尤其有用。由此可見，采用反向移液技術(shù)，可較好的提高移取蛋白溶液的度和重復(fù)性。