超微量分光光度計(jì)與蛋白質(zhì)檢測(cè)那點(diǎn)事

超微量分光光度計(jì)是實(shí)驗(yàn)室里常見(jiàn)儀器，常被用于檢測(cè)核酸的濃度和純度，那么它在蛋白質(zhì)檢測(cè)上的應(yīng)用呢？

常用的蛋白質(zhì)吸收波長(zhǎng)為280nm，其他常見(jiàn)的顯色法蛋白質(zhì)檢測(cè)所需要的波長(zhǎng)為562nm、595nm、650nm等。Microdrop系列超微量分光光度計(jì)的檢測(cè)波長(zhǎng)范圍覆蓋185-910nm，可以覆蓋大部分實(shí)驗(yàn)所需情況，并且內(nèi)置了直接檢測(cè)、BCA法、Bradford法、Lowry法等共6種可選計(jì)算方法，其基座模式能夠檢測(cè)0.5-2μL的樣本，大大節(jié)約了樣本的消耗。

但是在實(shí)際使用中，不時(shí)會(huì)有一些小伙伴發(fā)現(xiàn)，檢測(cè)出來(lái)的結(jié)果不準(zhǔn)確、不穩(wěn)定，這是為什么呢？

很大的一個(gè)原因是——樣本量。雖然基座檢測(cè)時(shí)樣本的量不是特別關(guān)鍵，但是必須保證兩根光纖之間形成完整的液柱，這樣才能保證兩根光纖之間形成樣本液柱，使得我們的光信號(hào)能夠完整通過(guò)樣本并回流到檢測(cè)器中。

要使樣本液滴能夠順利地被拉出液柱，需要保證液滴具有足夠大的表面張力，決定液滴表面張力的主要因素是溶液中水分子的氫鍵結(jié)合力。通常情況下，溶液中所有的溶質(zhì)（蛋白，DNA，RNA，鹽離子，去垢劑分子等）都會(huì)對(duì)表面張力產(chǎn)生影響，總的來(lái)說(shuō)純化獲得的蛋白質(zhì)溶液通常表面張力會(huì)較低。

因此，我們建議，在進(jìn)行純蛋白、Bradford，BCA，Lowry或者蛋白Pierce 660nm試驗(yàn)時(shí)，適當(dāng)增加上樣量至2μL，能夠有效幫助液柱形成，提高最終檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確和精確性。